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技術文章
產品特點
◎逆轉錄和定量PCR在一個反應管內一步完成，操作簡便快速；
◎使用我們研發的超級熱啟動聚合酶，反應特異性更高，酶動力更強，特別適合多重PCR反應；
◎反應緩沖液經充分優化，靈敏度高，zui低可檢測1pg總RNA中的目標片段,特別適合低拷貝RNA的檢測；
◎添加了百代生物RT-PCR活素，可明顯提升RT-PCR的產量，CT值一般早3-5循環，S型曲線更加典型。
產品介紹
BIOGHSC Super MultiProbe One Step Kit專為以RNA為模板的定量PCR檢測而設計，適合熒光探針法定量PCR分析。使用BIOGHSC Super MultiProbe One Step Kit，逆轉錄和定量PCR在一個反應管內一步完成，中間無開管和移液動作，操作非常簡便，也大大提高了實驗的效率，并降低了反應的污染風險。BIOGHSC Super MultiProbe One Step Kit使用我們研制優化的緩沖液，確保了反轉錄和定量PCR反應能夠快速、地完成。BIOGHSC Super MultiProbe One Step Kit的檢測靈敏度可達到1pg總RNA，與其它品牌的同類產品相比，具有更高的檢測靈敏度。各反應成分以 Mix的形式提供，非常方便實驗者使用。
產品成分 反應體系
組 分 | 100個反應 | 250個反應 |
RNase free ddH2O | 1ml | 1.25mlx2 |
2×BIOGHSC Super MultiProbe Mix | 1ml | 1.25mlx2 |
BIOGHSC Super Enzyme Mix | 50ul | 125ul |
RT-PCR Enhancer | 25ul | 62.5ul |
2xBIOGHSC Super MultiProbe Mix | 10μl |
BIOGHSC Super Enzyme Mix | 0.5μl |
RT-PCR Enhancer | 0.25ul |
上下游引物 (10μM) | 各0.6μl |
TaqMan Probe (10μM) | 0.5μl |
模板RNA | 10ng-1μg |
RNase free ddH2O | 加至20µl |
說明：1、BIOGHSC Super MultiProbe Mix包含dNTP Mix和Mg2+，BIOGHSC Super Enzyme Mix包含BIOG超級逆轉錄酶和BIOG超級熱啟動聚合酶、熒光保護素。2、一般來說反應體系中引物終濃度為0.3μM可得到較好的擴增效果。進行多重PCR反應時，不同靶基因引物的濃度搭配可以在0.1-1.0μM范圍內進行實驗優化。 3、TaqMan探針終濃度可以在0.1μM-0.45μM之間調整，進行多重PCR反應時，不同靶基因探針的濃度搭配應進行實驗優化。4、qPCR反應靈敏性高，模板量的準確性對結果影響很大，建議將模板適度稀釋后加入，或用50ul反應體系。5、模板體積不超過反應體積的10%。6、擴增產物長度請選擇在100bp-500bp范圍內，為100-200bp。 7、配制反應體系時，避免震蕩混勻，以防氣泡產生。8、反應條件：先于42℃逆轉錄反應20分鐘，再于95℃加熱10分鐘，以激活熱啟動DNA聚合酶，然后95℃ 15秒，60℃ 35秒，35-40個循環。該反應條件可根據目標片段的大小、引物的Tm值、檢測基因的多少等適當調整。8、如果模板具有復雜二級結構，可將反應溫度提高至55℃，有助于提高產量。
儲存和穩定性
干冰或藍冰運輸，-20°C 儲存，避免反復凍融 。
如每次使用量較少，推薦小份分裝使用。
有效期
-20℃保存條件下，有效期為1年。
質量控制
所有組分經檢測均無核酸外切酶，核酸內切酶，RNase殘留。
注意
本產品僅用于科研
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